L’attività si articola in due momenti di formazione. Ai protocolli: immobilizzazione enzimatica e attività della β-Galattosidasi (codice G1) si aggiungono la purificazione e l’SDS page della β-Galattosidasi. Gli studenti dapprima purificano, mediante cromatografia di affinità, la proteina ß-galattosidasi prodotta da cellule di Escherichia Coli modificate. La proteina è separata grazie all’interazione specifica fra la matrice della colonna cromatografia e la sequenza di poli-istidina (His-tag) legata alla proteina ß-galattosidasi. La sequenza codificante per l’His-tag è stata inserita in fase di costruzione del vettore di espressione utilizzato per sovraesprimere la proteina nei batteri. La purificazione permette di ottenere vari campioni proteici da caratterizzare mediante elettroforesi su gel di acrilammide in presenza di dodecil solfato di sodio (SDS-PAGE). Tale tecnica permette di stabilire con buona accuratezza sia il grado di purezza della proteina purificata, sia il suo peso molecolare. I campioni della proteina ß-galattosidasi, sono caricati su gel di poliacrilammide e confrontati grazie ad un analizzatore di immagini.

COSTO

attività in italiano:

• 370€ (n°stud ≤ 18)
• 500€ (19 ≤ n°stud ≤ 24)
• 660€ (25 ≤ n°stud ≤ 30)